酶标仪的标准配置包括405nm,450nm,490nm及630nm四块酶标仪滤光片,具有紫外功能的酶标仪还配备有340nm.
目前用于酶联免疫吸附测定,常使用的标记用酶是辣根过氧化物酶(HRP),对应的底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD)。底物在过氧化氢溶液的存在下,经辣根过氧化物酶作用,分别氧化为2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。
邻苯二胺(OPD)的氧化产物DAB, 在pH值为5.0左右时,在450nm波长处有较大吸收,此时可用450nm的酶标仪滤光片测定吸光值。当加入强酸作为终止试剂终止反应时,pH值降到接近0,此时较大吸收波长移至492 nm,此时可用492nm的滤光片测定吸光值。
四甲基联苯胺(TMB)的氧化产物联苯醌,一般在波长为450nm处有较大消光系数。使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min,便于检测。
因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定常用的。有的酶标仪以490nm酶标仪滤光片替代492nm滤光片,影响不大。
除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的酶标仪滤光片,双波长比色主要用于消除非特异干扰的影响。
如果实验需要用酶标仪作微量生化测定,就需要扩展紫外检测功能,此时需要一个340 nm波长滤光片。
总之,以上介绍的是常用的几个波长的滤光片,用户还可以根据自己的需求选择其他波长的酶标仪滤光片。一般各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,可以满足用户的不同需求。
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